Diabetologia：激活但功能破损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现出来口内自身血清到显现出来1同型乳癌流行病学症状的令人满意率在幼儿以前就有不太好的阐述，多个口内自身血清非典型的幼儿中的有70%在血清转换后10年内患病乳癌，而随访15年的幼儿这一%-减低到84%。相较之下，占流行病学1同型乳癌一半以上的同型1同型乳癌的发作组态还没有得到充分的研究课题。

越来越多的人开始适用分期系统来定义1同型乳癌的令人满意：个纤在显现出来多种口内自身血清时带入第1期中，显现出来血糖异常时带入第2期中，显现出来症状时带入第3期中。一些多发口内自身血清非典型的个纤，在1期和2期，令人满意较比较慢，并发展为发作的1同型乳癌。我们早先阐述了一第三组在首次检测到多种口内自身血清样本后据估计10年无乳癌的正因如此比较慢令人满意者，这第三组症状人数再加，但特征非常具纤。随后，我们发现口内自身专一性专一性CD8+T细胞膜反其所在令人满意缓比较慢的症状中的原则上不假定，但在近期发作和普遍假定的乳癌症状中的很非常容易检测到。这可能表明，与令人满意症状相较，这些症状自身免疫反其所的调节增强。

20世纪研究课题表明，尽管调节性T细胞膜(Treg)数量正常人，但乳癌症状假定一些特性缺陷，其中的包括对IL-2的反其所意志力减小。此外，乳癌症状中的的效其所CD4+T细胞膜可能对调节正因如此具抵抗性，表现为效其所T细胞膜的选择性逼近，共存产生的Treg和纤外产生的正向Treg，以及专一性经历的CD4+T细胞膜中的IL-2反其所逼近。本研究课题的目的是阐述了CD4+调节性T细胞膜(Treg)在一小群正因如此缓比较慢令人满意者中的的特征，他们的平均岁数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

比对方法：BOX研究课题是一项以人群为基础的纵向研究课题，在21岁一般而言确诊的症状亲属中的检验1同型乳癌的危险因素。我们早先阐述了长期缓比较慢令人满意者的特征，他们保证多重口内自身血清非典型超过10年，但没有显现出来乳癌的流行病学症状，比较慢性或非进行时性自身免疫。随后，10名在此期间保证无乳癌并愿意提供大量肝脏样本的缓比较慢令人满意者不属于T和B细胞膜特性比对。在目前的研究课题中的，8名比较慢令人满意者(SP第三组)，中的位岁数43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的口内自身血清非典型。所有的发起者都所处1同型乳癌令人满意的1期，尽管一些人随后失去了口内自身血清对某些专一性的非典型反其所，然而，一名症状已经所处2期据估计6年，但没有显现出来流行病学症状，一名症状被诊断为乳癌，该受试者72岁，在采集实验样本时，其HbA1c上升到53 mmol/mol(7%)，在建模中的对该NAD进行时了另行评估。剥离外周血单个连锁质子化细胞膜(PBMCs)，采用多参数流式细胞膜妖术和T细胞膜选择性试验评估NAD中的Treg的阈值、表同型和特性。适用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)进行时无督导聚类比对，评估Treg表同型。

结果：与卫生NAD相较，来自比较慢令人满意纤的清醒CD4+T细胞膜的督导聚类标示出，正向的清醒CD4+ Treg阈值减低，与组胺正向的TNFR具纤蛋白(GITR)强调减低有关。一名HbA1c上升的症状与令人满意缓比较慢者和反之亦然的对照第三组相较，Treg谱略有不同。特性比对表明，与卫生NAD相较，来自缓比较慢令人满意纤的Treg介导的CD4+效其所T细胞膜选择性相较受损。表现为对效其所CD4+T细胞膜CD25和CD134强调的选择性减低。

布1 深入的表同型比对标示出，CD4+Treg免疫球蛋白在比较慢令人满意链表中的减低。由FlowSOM转换成的Treg室，聚集在来自所有NAD的活CD4+CD45RA -细胞膜上。根据记号物强调鉴定出10个元簇:清醒T细胞膜_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T细胞膜;HLA-DR + GITR +清醒T细胞膜;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)适用9个不同Treg记号转换成的10个元簇的MST。每个结点均是由一个集群(100个集群)，更为大的元集群(10个元集群)在结点第三组外面上色。每个结点中的的饼布问到单个记号的强调级别。(b)每个元聚类的热布，以标示出整纤记号强调。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)转换成布，以及FlowSOM识别系统的每个元簇的大块。(e-l)相对金属量为每个metacluster木箱终点站布(金属量> 0.05%)确定为HD和SP第三组:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T细胞膜(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T细胞膜(l)。黄色红色均是由这些年来SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon一对一符号秩检验。此键适用于布形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

布2 适用CITRUS的预测模同型得出结论，Treg阈值的减低是令人满意缓比较慢的徽标。分级旁路(a - f)和葡萄比对(g-k)比较SP发起者和反之亦然的HD发起者在CD4+CD45RA−T细胞膜上的区别。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群纤的权威性布。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR强调进行时剥离，仿真FlowSOM群纤。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)第三组以及NADSP 606(黄色)中的CD25+ cd127的阈值简介布。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+旁路子集的木箱终点站布;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)柑橘簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3强调强度著色，箭头突出的簇被识别系统为SP和HD链表之间的不同。(j)木箱终点站布标示出了在SP(蓝点)和HD(灰点)第三组中的，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的相对金属量(%-)。(k)直方布标示出每个簇的表同型(粉红色)和Treg记号相对强调与历史背景强调(蓝色);上列，寄存器Treg_3;下面一行，寄存器Treg_4。历史背景与所有其他簇中的记号的强调有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon一对一符号秩检验

布3 与卫生献血者相较，令人满意缓比较慢者清醒treg的GITR减低。每个清醒CD4+T细胞膜元簇(清醒T细胞膜_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T细胞膜;HLA-DR + GITR +清醒T细胞膜;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个强调记号的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)链表的强调热布(sp606不包括在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇中的所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(黄色)的FlowSOM GITR强调串接，标示出直方布(c)和简介布(d)。Wilcoxon一对一符号秩和检验，p< 0.07(黄色)所有NAD包括，p< 0.05(蓝色)NADSP 606和反之亦然的HD不包括在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR强调，从分级旁路，从所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(黄色)串接，标示出直方布(e)和简介布(f) *p< 0.05, Wilcoxon一对一符号秩检验

布4 来自缓比较慢令人满意的CD4+ treg细胞膜控制效其所CD4+T细胞膜的意志力减小。SP第三组用蓝色的终点站和红色问到，HD第三组用白色的终点站和红色问到，黄色的终点站/红色问到NADsp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜进行时分选。CD4+CD25−(其所答者)被记号为CFSE, Treg按捕捉到的%-滴定。用抗CD3 /28微珠活化细胞膜，培训3过后进行时流式细胞膜妖术检测。(a-d)与CD4+其所答者相对其所的treg培训(其会)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD其所答者培训。(a,b,f) CFSE抑制(a,e)和CFSE选择性比率(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的选择性比率。适用非典型对照(正向的响其所细胞膜不含treg)测算选择性比率。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

布5 效其所CD4+T细胞膜对缓比较慢令人满意的T细胞膜活化的选择性更为敏感。SP第三组用蓝色的终点站和红色问到，HD第三组用白色的终点站和红色问到，黄色的终点站/红色问到NADsp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜进行时分选。CD4+CD25−(其所答者)被cfsel记号，treg按捕捉到的%-滴定。用抗CD3 /28微珠活化细胞膜，培训3过后进行时流式细胞膜妖术(CD25反染)和细胞膜因子比对。HD Treg与HD、SP或sp606其所答者共同培训。(a,b) CFSE抑制(a)和CFSE选择性比率(b)。(c,d) CD25选择性比率(c)和CD134选择性比率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培训中的的强调。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论断：我们得出的论断是，来自缓比较慢令人满意子的活化清醒CD4+Treg在GITR强调中的得到了扩展和丰富，强调了再进一步研究课题Treg在1同型乳癌风险个纤中的的异质性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28